乳酸脫氫酶測定方法

我們知道，現實生活中存在著各種各樣的的酶，這些酶可以單獨作用，也可以相互作用，對我們的人體產生很大的影響，但是相信大家對於酶的測定方法還不是很熟悉吧，不同酶的測定有不同的方式方法，而且方式方法也種類不一，現如今乳酸脫氫酶測定方法成為很多人研究的領域話題，那麼到底該如何測定呢，下面就讓我們一起來了解一下乳酸脫氫酶測定方法吧。

方法：

實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時儘量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，餘孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩幹，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配製，輕輕混勻，在使用前一小時內配製），37℃，60分鐘。

3. 溫育60分鐘後，棄去孔內液體，甩幹，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩幹。

4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘後，棄去孔內液體，甩幹，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩幹。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，後3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應儘量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到後應儘快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液後15分鐘以內進行檢測。

以上內容為我們介紹了乳酸脫氫酶測定方法，我相信這些內容可以引起大家的興趣，我相信大家可以有效的最快的直接的測定出乳酸脫氫酶，可能你也是一個研究愛好者，那就趕快去實踐一翻吧！